Ауксин. Визначення змісту гормонів у рослині

Ви перебуваєте: Ауксин

Для кількісного визначення ауксину в будь-якій тканині рослини цю тканину екстрагують яким-небудь розчинником, а потім наносять екстракт на іншу тканину, яка кількісно реагує на ауксин, що втримується в ньому. Звичайно цю тканину поміщають у діетиловий ефір при температурі близько 0°С и обережно струшують протягом 2-4 ч. Отриману ефірну витяжку потім концентрують до невеликого обсягу й уводять в агаровий блок, який поміщають на одну сторону чутливого до ауксину декапитированного органа. Звичайно для цієї мети використовують піхву першого аркуша, або доилеоптиль, вирощеного в темряві вівса. Асиметрично розташований ауксин підсилює в досліджуваній рослині ріст тільки тієї тканини, яка перебуває безпосередньо під ним. Нерівномірний ріст двох сторін колеоптиля приводить до утвору вигину, кут якого прямо пропорційний кількості введеного в блок ауксину. Таким чином, для кількісного визначення ауксину в невідомому органі з нього готується витяжка, яка наноситься на чутливий до ауксину орган. Виниклий вигин виміряється й рівняється з вигинами, викликаними відомими кількостями ауксину в інших серіях досвідів. Описаний метод використання відповідної реакції організму для виміру кількості хімічної сполуки, що втримується у витяжці, називається биотестом.

Биотесты, засновані на індукції певного рівня відповідної реакції, що розвивається звичайно в рослин під впливом даного гормону, існують для всіх рослинних

гормонів. У цей час їх поступове витісняють хімічні й фізичні методи головним чином тому, що, хоча биотесты й прості у виконанні, вони піддані впливу цілого ряду зовнішніх факторів. Загальним недоліком биотестов є, наприклад, те, що із тканини разом з гормонами часто екстрагуються ингибирующие з'єднання. Така суміш викликає більш слабку ростовую реакцію, чому та, яка могла б виникнути під впливом даного кількості ростового гормону під час відсутності інгібіторів. У результаті відомості про зміст у тканині обумовленого гормону виявляються помилковими. Більшість сучасних методів засноване на очищенні гормонів, що втримуються в отриманому екстракті, хроматографічними методами, такими, як хроматографія на папері, у тонких шарах силікагелю або на колонках з кульками із синтетичної смоли. Самим чутливим методом є газова хроматографія. При її використанні летуче похідне гормону відділяється від домішок у процесі його проходження зі струмом газу при підвищеній температурі через стовпчик з матеріалом, який по-різному поглинає гормон і домішки. Інший сучасний метод - рідинна хроматографія при високому тиску. У цьому методі розчин гормону з домішками під тиском проходить через стовпчик, заповнену матеріалом з різною поглинальною здатністю стосовно гормону й домішкам. Оскільки у всіх цих методах для проходження гормону й домішок через стовпчик потрібне різний час, гормон очищається і його можна визначити безпосередньо. Як у газовій, так і в рідинній хроматографії під високим тиском гормон можна виявити й ідентифікувати після очищення. Фізичний детектор того або іншого типу виконує цю операцію відразу ж після виходу обумовлених з'єднань зі стовпчика. ИУК, наприклад, можна виявити й кількісно визначити, вимірюючи при певній довжині хвилі флуоресценцію, порушувану при опроміненні розчину ультрафіолетовими променями з певною довжиною хвилі. Гиббереллины ідентифікують за допомогою мас-спектрометра, у який ці з'єднання надходять безпосередньо зі стовпчика газового хроматографа. Мас-спектрометр - складно влаштований прилад - використовується для того, щоб розщепити всі молекули досліджуваного речовини на безліч молекулярних іонів (іонізацію проводять шляхом бомбардування речовини пучком електронів або іншими способами), які потім розділяються відповідно до величини відносини їх маси до заряду. Оскільки регистрируемые набори фрагментів (молекулярних іонів) характерні для певних вихідних молекул, за допомогою цього приладу можна ідентифікувати й кількісно визначити кожної гормон